常用的*原性檢測(cè)方法

時(shí)間：2021-11-10作者：廣東省華微檢測(cè)股份有限公司瀏覽：909

常用的*原性檢測(cè)方法

1、ELISA-橋法

對(duì)抗體藥物進(jìn)行*原性檢測(cè)是生物技術(shù)藥物申請(qǐng)臨床試驗(yàn)和注冊(cè)的重要內(nèi)容，盡管已有的動(dòng)物試驗(yàn)顯示*原性不一定會(huì)在人體內(nèi)產(chǎn)生預(yù)期的*反應(yīng)，但對(duì)藥物*反應(yīng)的評(píng)價(jià)仍顯得十分重要。 將抗原或抗體固定的過(guò)程稱為包被，換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。ELISA-橋法包被藥物，用標(biāo)記的藥物檢測(cè)。此法的優(yōu)點(diǎn)是能檢測(cè)各類抗體亞型，無(wú)種屬特異性，可高通量檢測(cè)，缺點(diǎn)是不易檢測(cè)到低親和力的抗體，包被或標(biāo)記時(shí)可能會(huì)掩蓋或改變藥物的抗原表位，易受藥物本身的干擾。

2、ELISA-直接法

抗體的包被一般均采用直接吸附法，蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。 ELISA-直接法包被藥物，用標(biāo)記抗體檢測(cè)。ELISA-直接法用于*原性檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是可能會(huì)增加檢測(cè)低親和力抗體的能力，且高通量。然而當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法。而且直接包被時(shí)可能會(huì)掩蓋或改變藥物的表位，僅檢測(cè)單一亞型，有種屬特異性，多次洗滌時(shí)丟失低親和力抗體，參考品與樣本之間試劑可能不同。

3、ELISA-間接法

ELISA-間接法包被單抗或生物素，再加藥物，即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。

4、放射*分析法（RIA）

RIA 是一種微量分析法，就是利用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體，然后與被測(cè)的抗體或抗原結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物的原理來(lái)進(jìn)行分析的。 它兼有放射性同位素的靈敏性和抗原、抗體反應(yīng)的特異性兩大特點(diǎn)。該法還具有準(zhǔn)確性高和精密度好，便于標(biāo)準(zhǔn)化以及操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。由于RIA具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、測(cè)量簡(jiǎn)單和成本低等優(yōu)點(diǎn)，RIA在應(yīng)用方面具有一定的生命力。但是，又因?yàn)樗^致命的弱點(diǎn)就是使用放射性核素，此外標(biāo)記物有效使用時(shí)間短，難以實(shí)現(xiàn)操作和測(cè)量的自動(dòng)化等，它的進(jìn)一步發(fā)展受到一些局限?，F(xiàn)在*分析技術(shù)都在朝著非同位素標(biāo)記*分析的方向發(fā)展。

5、電化學(xué)發(fā)光法（ECL）

電化學(xué)發(fā)光法（ECL）源于電化學(xué)法和化學(xué)發(fā)光法，不僅可以應(yīng)用于所有的*測(cè)定，而且還可用于DNA／RNA探針檢測(cè)。它的優(yōu)點(diǎn)是液相法，可檢測(cè)各種抗體亞型，無(wú)種屬特異性、高通量，可使用高濃度基質(zhì)，檢測(cè)表面積大和信號(hào)穩(wěn)定。缺點(diǎn)是需制備2種標(biāo)記物（生物素和TAG），標(biāo)記物分子的表位可能會(huì)變化或標(biāo)記過(guò)程會(huì)改變分子，所用試劑通用性差。

6、表面等離子體共振

表面等離子體共振法的優(yōu)點(diǎn)是液相法，不需結(jié)合物（酶標(biāo)記抗體），能檢測(cè)到不同親和力的抗體和各亞型抗體，無(wú)種屬特異性。缺點(diǎn)是化學(xué)連接可能會(huì)影響分子，與葡聚糖連接影響表位的暴露，復(fù)性可能會(huì)使分子降解，所用試劑通用性差，低通量，如果產(chǎn)生的抗體是藥物同種亞型的抗體，要證實(shí)一種人源化抗體的抗抗體反應(yīng)比較困難，靈敏度低。

7、酶聯(lián)*斑點(diǎn)法（ELISpot）

酶聯(lián)*斑點(diǎn)法（ELISpot）的原理與ELISA類似，也是檢測(cè)細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子或其他可溶性蛋白的方法，它不僅能測(cè)定細(xì)胞因子量，還可通過(guò)計(jì)數(shù)檢測(cè)分泌此細(xì)胞因子的細(xì)胞頻率，靈敏度**ELISA，而且實(shí)驗(yàn)采用的捕獲抗體不會(huì)影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。缺點(diǎn)是比ELISA技術(shù)復(fù)雜而費(fèi)時(shí)，需嚴(yán)密控制實(shí)驗(yàn)條件，操作人員需技術(shù)熟練，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，以減少實(shí)驗(yàn)偏差；屬半定量方法。

8、*PCR法（IPCR）

*PCR法（IPCR）是在ELISA的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的，用PCR擴(kuò)增代替ELISA的酶催化底物顯色。PCR具有很強(qiáng)的放大能力，可以定量地檢測(cè)DNA和RNA，具有非常高的靈敏度和特異性，因此，將與抗原結(jié)合的特異抗體通過(guò)連接分子與DNA結(jié)合，再經(jīng)PCR擴(kuò)增定量檢測(cè)抗原使得IPCR的靈敏性**ELISA。 與對(duì)應(yīng)的ELISA比較，IPCR至少可使抗體檢測(cè)的靈敏度提高1000倍，而且該法中僅僅采用稀釋的方法就可以消除生物樣品中基質(zhì)的干擾。

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• 詞條

  詞條說(shuō)明

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  病毒主要由遺傳物質(zhì)和蛋白質(zhì)組成是介于生命和非生命之間的一種物質(zhì)形式，由一個(gè)或多個(gè)核酸分子（DNA或RNA）組成的基因組，其外面有一層蛋白或脂蛋白的保護(hù)性外殼。有些病毒有囊膜和刺突，如流感病毒。病毒是微小的，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的一類非細(xì)胞型微生物，并且，病毒沒(méi)有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，只能依靠寄生在別的人或動(dòng)物體內(nèi)來(lái)維持生命。病毒的應(yīng)用：1.滅活病毒做2.基因工程中作載體3.細(xì)胞工程中作細(xì)胞融合的誘因（滅活病毒）病毒

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