多能干細(xì)胞（ES/iPS）凍存和復(fù)蘇方法

時(shí)間：2019-06-27作者：上海埃澤思生物科技有限公司瀏覽：79

    多能干細(xì)胞(ES/iPS)凍存是干細(xì)胞擴(kuò)增傳代過(guò)程中重要的一環(huán)，但是多能干細(xì)胞不同于普通細(xì)胞系，其增殖擴(kuò)增過(guò)程中需要聚團(tuán)生長(zhǎng)，為保持其細(xì)胞活性，不建議單細(xì)胞傳代。而   且使用血清+DMSO 凍存方法，不能很好的保持細(xì)胞活性，且復(fù)蘇細(xì)胞成活率較低。本文就重點(diǎn)介紹多能干細(xì)胞進(jìn)行凍存以及解凍的標(biāo)準(zhǔn)化步驟。
    介紹使用 AppliedCell? 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基以及 Advance 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞， 本方法適用于 AppliedCell? 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基以及 Advance 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)（同樣適用于 mTesR 以及 E8 系統(tǒng)培養(yǎng)的細(xì)胞），凍存以及復(fù)蘇前后，應(yīng)當(dāng)使用同一種培養(yǎng)基，復(fù)蘇傳代后可以更換其他培養(yǎng)體系。
Serum-Free 干細(xì)胞凍存液（AC-1001011/12）是埃澤思生物專(zhuān)為 ES/iPS 細(xì)胞設(shè)計(jì)的的一款化學(xué)成分確定，無(wú)血清，無(wú)動(dòng)物源成分，且*程序降溫的高效凍存液。具體凍存及復(fù)蘇操作方法如下：
1、凍存：以下操作方法以 6 孔板為例：
（1）Serum-Free 干細(xì)胞凍存液為即拿即用，且 4℃保存，凍存液拿出后應(yīng)快速放回 4℃；
（2）使用多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）消化細(xì)胞；
（3）收集細(xì)胞，室溫 300×g 離心 5 分鐘；
（4）小心吸掉上清液，不要干擾細(xì)胞團(tuán)；
（5）用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞，并均勻分裝到凍存管中
采用非程序降溫法，將凍存管直接放入-80℃冰箱中，凍存 24h 后轉(zhuǎn)移至中長(zhǎng)期保
存。
2、解凍
預(yù)先包被細(xì)胞培養(yǎng)板，人 ES 和 iPS 細(xì)胞解凍后應(yīng)立即接種到培養(yǎng)板中。
（1）多能干細(xì)胞培養(yǎng)基/Advance 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基室溫平衡 15-30min,不能 37℃加熱;
（2）在水浴鍋中持續(xù)晃動(dòng)凍存管，37℃水浴鍋中快速解凍細(xì)胞，直至細(xì)胞完全融化；
（3）取出凍存管，用 70％擦拭凍存管表面；
（4）準(zhǔn)備 15mL 離心管，預(yù)先加入 5mL 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸浮液緩慢逐滴至
15mL 離心管中，盡量保持細(xì)胞聚團(tuán)狀態(tài)。
（5）在室溫 300×g 離心 5 分鐘。
（6）吸掉上清，注意不要干擾細(xì)胞沉淀。使用 1mL 多能干細(xì)胞培養(yǎng)基輕輕地重懸細(xì)胞
3-5 次，不要破壞細(xì)胞聚團(tuán)狀態(tài)。
（7）分別取 0.5mL 細(xì)胞懸液，均勻接種到包被好的 6 孔板的 2 個(gè)孔中，并分別補(bǔ)充多能干細(xì)胞培養(yǎng)基至 2m。
（8）置于 37°C 細(xì)胞培養(yǎng)箱中。在前后左右呈十字形搖動(dòng)培養(yǎng)板板 5 次，以均勻分散細(xì)胞。
（9）每天更換培養(yǎng)基，并顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀/NewsInfo.aspx?id=22


上海埃澤思生物科技有限公司專(zhuān)注于間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基,多能干細(xì)胞培養(yǎng)基,無(wú)血清細(xì)胞凍存液等

• 詞條

  詞條說(shuō)明

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  在細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞凍存是較關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，尤其在細(xì)胞**、細(xì)胞存儲(chǔ)中對(duì)細(xì)胞凍存較有特殊要求，下面就根據(jù)降溫速度以及凍存液組分對(duì)細(xì)胞凍存做詳細(xì)介紹。 根據(jù)降溫速度區(qū)分，細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。根據(jù)凍存方式不同可以分為慢速凍存（程序降溫法）與快速凍存（非程序降溫法）。 程序降溫凍存技術(shù)要點(diǎn)是慢凍，標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2/℃ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5