聚丙烯酰胺凝膠電泳色譜儀的類型

時(shí)間：2017-02-17作者：濟(jì)南福的機(jī)械有限公司瀏覽：54

聚丙烯酰胺凝膠電泳色譜儀根據(jù)有無(wú)濃縮效應(yīng)可分為連續(xù)凝膠電泳色譜儀和不連續(xù)凝膠電泳色譜儀。
一、連續(xù)凝膠電泳色譜儀：
采用相同孔徑的凝膠和相同的緩沖液（樣品緩沖液、凝膠緩沖液和電極緩沖液），在pH恒定和離子強(qiáng)度相同的條件下進(jìn)行電泳。
1、分離效應(yīng)：
主要靠電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)實(shí)現(xiàn)分離。
2、特點(diǎn)：
（1）優(yōu)點(diǎn)：
1）制膠簡(jiǎn)單，快捷。
2）緩沖液pH恒定，可防止樣品進(jìn)膠后因pH改變而發(fā)生的凝聚和沉淀。
3）緩沖液組成簡(jiǎn)單，來(lái)源廣泛。
（2）缺點(diǎn)：
分辨率不高。
二、不連續(xù)凝膠電泳色譜儀：
采用不同孔徑的凝膠和不同的緩沖液，在電泳過(guò)程中，由于濃縮膠的堆積作用，使樣品在濃縮膠和分離膠界面上先濃縮成一條窄帶，然后在一定濃度或濃度梯度的分離膠上進(jìn)行分離。
1、系統(tǒng)的不連續(xù)性表現(xiàn)：
（1）凝膠系統(tǒng)的不連續(xù)性：
1）上層為大孔徑的濃縮膠。
2）下層為小孔徑的分離膠。
（2）緩沖液離子組成和各層縮膠pH的不連續(xù)性：
1）電極緩沖液為pH = 8.3的Tris－甘氨酸緩沖液。
2）濃縮膠緩沖液為pH = 6.8的Tris－HCl緩沖液。
3）分離膠緩沖液為pH = 8.9的Tris－HCl緩沖液。
（3）電位梯度的不連續(xù)性：
在電場(chǎng)中形成不連續(xù)的電位梯度。
2、分離效應(yīng)：
在不連續(xù)凝膠電泳中存在三種物理效應(yīng)，即樣品的濃縮效應(yīng)、凝膠的分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)。這三種效應(yīng)同時(shí)存在，對(duì)蛋白質(zhì)樣品起協(xié)同作用，使樣品各組分根據(jù)帶電量、分子質(zhì)量和形狀按一定的順序分離。
（1）濃縮效應(yīng)：
使樣品在濃縮膠中濃縮成一條窄帶，然后進(jìn)入分離膠進(jìn)行分離。
（2）分子篩效應(yīng)：
大小和形狀不同的樣品通過(guò)一定孔徑的分離膠時(shí)，受阻滯的程度不同而遷移率不同。
（3）電荷效應(yīng)：
在分離膠中，蛋白質(zhì)表面凈電荷不同，遷移率不同。
3、特點(diǎn)：
（1）分辨率高。
（2）適用于復(fù)雜和特殊樣品的分離。
    


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