百螢 活性氧Cell Meter 熒光法胞內(nèi)總ROS檢測試劑盒 深紅色熒光

時(shí)間：2024-08-29作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：20

一、百螢 活性氧Cell Meter 熒光法胞內(nèi)總ROS檢測試劑盒概述

 

活性氧（ROS）是氧正常代謝的副產(chǎn)物，在細(xì)胞信號傳導(dǎo)中起重要作用。ROS的積累會嚴(yán)重破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。氧化應(yīng)激在疾病，糖尿病，骨質(zhì)疏松癥，，炎性疾病，許多神經(jīng)退行性疾病和癌癥中的作用已得到公認(rèn)。ROS測量將有助于確定氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)各種細(xì)胞內(nèi)途徑。Cell Meter 熒光細(xì)胞內(nèi)總ROS活性測定試劑盒使用我們專有的ROS Brite 670探針來定量活細(xì)胞中的ROS。與ROS反應(yīng)后，可滲透細(xì)胞且無熒光的ROS Brite 670表現(xiàn)出很強(qiáng)的熒光信號。ROS Brite 670探針位于細(xì)胞質(zhì)中。ROS Brite 670探針的熒光信號可以通過熒光顯微鏡，高含量成像，熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀進(jìn)行測量。Cell Meter 熒光細(xì)胞內(nèi)總ROS活性測定試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光測定法，可在孵育1小時(shí)內(nèi)檢測活細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)ROS（尤其是氧化物和羥基自由基）?？梢允褂脽晒饷笜?biāo)儀或帶有Cy5濾光片的熒光顯微鏡以方便的96孔或384孔板進(jìn)行檢測。

二、百螢 活性氧Cell Meter 熒光法胞內(nèi)總ROS檢測試劑盒適用儀器

 

流式細(xì)胞儀

 

Ex:    640nm

Em:   660/20nm

通道:  APC通道

 

 

熒光顯微鏡

 

Ex:    CY5濾波片組

Em:  CY5濾波片組

孔板:  黑色透明底板

 

 

 

熒光酶標(biāo)儀

   

 Ex:    650nm

Em:   675nm

Cutoff:  665nm

孔板:  黑色透明底板

讀取模式:底讀模式

 

 

三、百螢 活性氧Cell Meter 熒光法胞內(nèi)總ROS檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)方案

 

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡

1.在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2.用測試化合物處理細(xì)胞以誘導(dǎo)ROS
3.添加ROS Brite 670工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）
4.將細(xì)胞在37℃下染色30-60分鐘
5.在Ex / Em = 650/675 nm（截止= 665 nm）或使用TRITC濾光片組的熒光顯微鏡下檢測熒光（底部讀取模式）

 

適用于流式細(xì)胞儀

1.在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2.用測試化合物處理細(xì)胞以誘導(dǎo)ROS
3.將ROS Brite 670與細(xì)胞一起孵育30-60分鐘
4.使用具有FL4通道的流式細(xì)胞儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度

 

溶液配制

1.儲備溶液配制

        除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. ROS Brite 670原液（500X）：
將40μLDMSO（組分C）加入到ROS Brite 670（組分A）的小瓶中并充分混合以制備500X ROS Brite 670儲備溶液。 避光。 注意：20μL的500X ROS Brite 670原液足以容納1個平板。對于流式細(xì)胞儀，為方便起見，可將5倍ROS Brite 670儲備液稀釋5倍至DMSO中。為了存放，請將管子緊緊密封。

 

2.工作溶液配制

        將20μL500XROS Brite 670儲備溶液加入10 mL分析緩沖液（組分B）中，充分混合，制成ROS Brite 670工作溶液。 注意：此ROS Brite 670工作溶液在室溫下穩(wěn)定至少2小時(shí)。

 

操作步驟

（適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡）

1.用10μL10X測試化合物（96孔板）或5μL5X測試化合物（384孔板）在所需緩沖液（如PBS或HHBS）中處理細(xì)胞。對于對照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。

2.為了誘導(dǎo)ROS，將細(xì)胞板在室溫下或在5％CO2,37℃培養(yǎng)箱中孵育一段時(shí)間（例如：用100μM叔丁基（TBHP）處理Hela細(xì)胞30分鐘）。

3.向細(xì)胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ROS Brite 670工作溶液。

4.將細(xì)胞在5％CO2,37℃培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至60分鐘。

5.使用熒光酶標(biāo)儀（底部讀取模式）在Ex / Em = 650 / 675nm（截止值= 665nm）檢測熒光增加，或使用具有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

 

（適用于流式細(xì)胞儀）

1.以5×105至1×106個細(xì)胞/ mL的密度制備細(xì)胞。 注意：應(yīng)根據(jù)個體評估每個細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的細(xì)胞密度。

2.用所需緩沖液（如PBS或HHBS）處理細(xì)胞。 對于對照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。

3.為誘導(dǎo)ROS，將細(xì)胞板在室溫或5％CO2,37°C培養(yǎng)箱中孵育至少30分鐘（用100μM叔丁基（TBHP）處理的Hela細(xì)胞30分鐘）。

4.將1μL/ mL細(xì)胞的500X ROS Brite 670儲備溶液或5μL/ mL細(xì)胞的100X ROS Brite 670儲備溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)基中。

注：1μL/mL 表示每毫升細(xì)胞培養(yǎng)基中添加的ROS Brite 670儲備液體積為1微升。這個濃度是相對于細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積而言的，因此也可以說是在每升細(xì)胞培養(yǎng)基中添加1毫升ROS Brite 670儲備液。這種濃度通常用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，以使得實(shí)驗(yàn)物質(zhì)與細(xì)胞有良好的相互作用，同時(shí)不會對細(xì)胞造成太大的毒性影響。該濃度僅為初學(xué)者進(jìn)行指導(dǎo)，請根據(jù)自己的實(shí)際情況，調(diào)整濃度，優(yōu)化自己的實(shí)驗(yàn)。

5.將細(xì)胞在5％CO2,37℃培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

6.使用具有FL4通道的流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度。





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