Tris飽和是如何配制的

時(shí)間：2022-01-25作者：湖北新德晟材料科技有限公司瀏覽：513

  Tris飽和為淺黃色透明液體，下層為相，，上層為Tris 緩沖液pH>7.8，是用Tris-HCl（pH8.0）飽和過的重蒸，有刺激性氣味，內(nèi)加有抗氧化的8-羥基。Tris飽和用于分離DNA。

  Tris飽和的配置：冰箱取出重蒸,室溫放置，之后68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂，加8－羥基至0.1％和β－巰基至0.2％,（原液14.4MOL/ML），混勻，溶液呈現(xiàn)黃色，倒入分液漏斗中（也可在燒杯中進(jìn)行）加入等溶劑的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反復(fù)混勻后，靜至分層；放出下層黃色液，棄上層、加固體Tris 約 1g/100ml,搖勻，去水相、加?0.1MOL/ML Tris(PH8.0)平衡數(shù)次，至 PH 為 8.0、0.1MOL/ML Tris(PH8.0)于棕色瓶中4 度保存。

  組織裂解液，確保pH為8.0左右(可加入0.1體積的1M Tris-HCl，pH8.0，將其調(diào)為8.0左右)，再加入0.5體積的Tris飽和（使用時(shí)靜置，取下層相使用。上層為Tris-HCl溶液，是為阻止與空氣接觸，以減緩的氧化），0.5 體積：(24：1) ，振蕩10秒鐘后冰浴15分鐘。離心后取水相（上層）加等體積沉淀 DNA，75%漂洗1次，微干燥后溶于適量TE中備用。

  Tris飽和一般PH大于7.8，用于DNA 的提取。其中，是強(qiáng)的蛋白變性劑，可以使細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)變性析出，而Tris的主要作用是防治止類氧化，若類氧化，則會(huì)形成醌（兩個(gè)環(huán)），醌含有強(qiáng)自由基，會(huì)破壞核酸結(jié)構(gòu)。同時(shí)，由于PH值大于7，在堿性環(huán)境中DNA處于水相，RNA處于**相，從而分離上清，即可得到 DNA。

  Tris平衡有較強(qiáng)的腐蝕性，應(yīng)盡量避免皮膚接觸或吸入體內(nèi)。如發(fā)現(xiàn)變?yōu)榧t色或棕色，表明已發(fā)生氧化，不能繼續(xù)使用。

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