Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS,均為生物化學(xué)實驗和分子生物學(xué)實驗中經(jīng)常使用的緩沖劑,它們的分子結(jié)構(gòu)中都含有Tris的分子結(jié)構(gòu)。那么在使用中這幾種緩沖劑與Tris有哪些差異呢?它們各自之間又有哪些相同或不同之處呢?這里對這幾種緩沖劑進(jìn)行總結(jié)。
Tris
三羥(Tris),25°C下的pKa為8.06,緩沖范圍7.0~9.0。其常用實驗如下:
(1)常用于凝膠電泳緩沖液中,例如TAE或TBE;
(2)常用于制備Laemmli緩沖液;
(3)常與甘氨酸和SDS一起制備運行緩沖液和上樣緩沖液;
(4)可以用作陰離子交換層析中的結(jié)合緩沖液和洗脫液;
(5)被用作RNA雜交和DNA裂解的緩沖液。
在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過程中要考慮使用環(huán)境;Tris的伯胺基在一定程度上與各種分子反應(yīng),包括RNA酶抑制劑,醛,常見金屬如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,酶,以及DNA,此外,Tris不適用于二(BCA)測定。
Bis-Tris
Bis-Tris,雙(2-羥乙基)氨基(三羥),兩性離子緩沖劑,25°C下pKa為6.46,pH緩沖范圍為5.8~7.2。其應(yīng)用領(lǐng)域如下:
(1)作為各種類型電泳的樣品緩沖液,凝膠緩沖液和運行緩沖液;
(2)作為陰離子交換色譜法中的緩沖液;
(3)被用于鹵代烷烴脫鹵酶結(jié)晶過程的X射線晶體學(xué)研究;
(4)低導(dǎo)電性和高靈敏度,是NMR光譜的有效緩沖液;
(5)與人肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(FAB)相互作用并影響蛋白質(zhì)動力學(xué)。
Bis-Tris能與Cu2+和Pb2+形成強(qiáng)復(fù)合物,與許多常見金屬形成弱復(fù)合物,因此在含有金屬離子的溶液中使用時,應(yīng)考慮其絡(luò)合常數(shù)。此外,在有壓力變化的體系中,可使用Bis-Tris緩沖溶液。Bis-Tris可替代高毒性鹽緩沖劑,但同樣不適用于二(BCA)測定。
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詞條
詞條說明
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Bicine它是一種兩性離子緩沖液,它與許多常見金屬形成強(qiáng)絡(luò)合物;因此,穩(wěn)定常數(shù)選擇此緩沖液時應(yīng)考慮濃度。它可用于蛋白質(zhì)結(jié)晶的解決方案和作為移動陽離子交換色譜中的相緩沖液和洗脫液。MES用于含金屬離子的溶液中,因為它不會與大多數(shù)金屬形成絡(luò)合物。MES通常用于酵母,細(xì)菌和哺乳動物細(xì)胞的緩沖培養(yǎng)基中,但濃度**10 mM時對植物有毒。MES在各種色譜和電泳實驗中也是很好的緩沖液選擇,因為它顯示出較低的
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