緩沖劑HEPES、PIPES的制備及注意事項(xiàng)

時(shí)間：2021-06-10作者：武漢德晟生化科技有限公司瀏覽：73

HEPES
HEPES是兩性離子Good's緩沖液，在6.8至8.2的pH范圍內(nèi)有效。這使HEPES在生理pH值下成為有效的緩沖液。該緩沖液可用于多種生物的細(xì)胞培養(yǎng)基中。它也可用作蛋白質(zhì)研究中的結(jié)合緩沖液，用于陽(yáng)離子交換洗脫實(shí)驗(yàn)中，以及在凝膠電泳中用作運(yùn)行緩沖液。
HEPES的制備步驟：
要制備1升1M HEPES緩沖溶液，請(qǐng)將238.30 g? HEPES溶解?在750 mL水中。使用10N調(diào)節(jié)至所需的pH。
注意事項(xiàng)：
HEPES可溶于水，價(jià)格*，并且通常具有生物惰性。但是，它確實(shí)參與了產(chǎn)生自由基的氧化還原反應(yīng)，并干擾了DNA和限制性內(nèi)切酶之間的反應(yīng)，但是由于空間位阻，其干擾程度小于Tris。同樣重要的是要注意，當(dāng)使用異質(zhì)連接蛋白通道時(shí)，不應(yīng)使用HEPES，因?yàn)樗鼤?huì)抑制其功能。
PIPES
PIPES是緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。它是兩性離子Good's緩沖液，在6.1至7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有不同，PIPES的濃度僅為HEPES濃度的一半。該緩沖劑不會(huì)與金屬絡(luò)合，因此可用于含金屬離子的溶液。
PIPES的制備步驟：
要制備1升1M PIPES游離酸緩沖溶液，請(qǐng)將302.37g ?PIPES游離酸添加到600 mL 水中。使用10N調(diào)節(jié)至所需的pH值。
注意事項(xiàng)：
直到溶液的pH值升高到6.5以上時(shí)，PIPES的游離酸才*溶解，但是PIPES的鹽很*溶解。如果使用的是游離酸形式的緩沖液，請(qǐng)使用將其轉(zhuǎn)化為鹽，以提高在較低pH下的溶解度。像HEPES一樣，PIPES不適用于涉及氧化還原反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致自由基的形成。


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