Hepes緩沖液用于細(xì)胞培養(yǎng)研究中需要注意什么？

時間：2021-05-21作者：武漢德晟生化科技有限公司瀏覽：30

HEPES是一種兩性離子**化學(xué)緩沖劑，二十個Good緩沖劑之一。在無細(xì)胞制劑的比較生物學(xué)分析中被證明**傳統(tǒng)緩沖液。它具有許多特性，使其非常適合作為組織培養(yǎng)基的緩沖劑，并且不需要特殊的環(huán)境即可保持正確的pH值。HEPES不結(jié)合二價陽離子，在0°C時可溶至2.25M。注意：由于DpKa /°C為-0.014，因此記錄在HEPES緩沖介質(zhì)中的pH值將隨介質(zhì)溫度成反比。
大多數(shù)組織培養(yǎng)基被碳酸和5％CO?2緩沖至生理pH?。因此，在開放的組織培養(yǎng)皿中，在顯微鏡載物臺上的pH將隨著CO?2排入大氣而在數(shù)分鐘內(nèi)*增加并離開生理范圍?？刂苝H的一種常用方法是使用不依賴CO?2的介質(zhì)或添加10–25?mM?HEPES以增加緩沖能力。
僅HEPES不能完全控制碳酸鹽緩沖介質(zhì)的長期堿化，并且測試更改為其他成像介質(zhì)或HEPES的添加如何影響所研究的過程也很重要。例如，碳酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是細(xì)胞內(nèi)pH的主要調(diào)節(jié)劑?在無碳酸鹽的培養(yǎng)基或PBS等緩沖液中無法正常運(yùn)行的動物細(xì)胞中。較好但技術(shù)上較復(fù)雜的方法是控制CO?2濃度，以便可以使用常規(guī)組織培養(yǎng)基，這對于長期成像實(shí)驗(yàn)而言尤其重要。大多數(shù)**臺式培養(yǎng)箱都具有主動CO?2控制選項(xiàng)，其中理想情況下放置在樣品附近的傳感器可測量CO?2濃度，從而向主動氣體混合器提供反饋信號。但是，有源CO?2控制器價格昂貴且并非沒有麻煩，并且傳感器故障可能會帶來錯誤的安全感。
以上便是Hepes緩沖液用于細(xì)胞培養(yǎng)研究的原理，而Hepes緩沖液在其他領(lǐng)域中也有著許多應(yīng)用，使得市面上的Hepes產(chǎn)品質(zhì)量不一。這也導(dǎo)致了一些需要高質(zhì)量的Hepes緩沖液的廠家采購工作比較困難，而大家如若有生物緩沖液的需求可聯(lián)系我司。
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