細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中,細(xì)胞計(jì)數(shù)是一項(xiàng)基本功,對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)條件以及需要定量的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)都關(guān)鍵。這里介紹使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的經(jīng)典方法以及中間一些需要注意的細(xì)節(jié)。
制備細(xì)胞懸液:
對(duì)于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,我們需要使用胰酶消化的方法使細(xì)胞從培養(yǎng)皿表面脫落
根據(jù)需要加入合適體積的培養(yǎng)基,將細(xì)胞進(jìn)行中和及稀釋?zhuān)缘玫骄|(zhì)的細(xì)胞懸液。要求盡可能將細(xì)胞吹打散開(kāi),不要?dú)埩羧魏渭?xì)胞團(tuán)
準(zhǔn)備血細(xì)胞計(jì)數(shù)器:
使用70%乙醇將蓋玻片和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器清潔干凈
將將蓋玻片潤(rùn)濕(使用水或呼一口氣,目的是使蓋玻片與血細(xì)胞計(jì)數(shù)器接觸緊密,易于粘連),并覆蓋至血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上
臺(tái)盼蘭染色(可選):
如果需要計(jì)算細(xì)胞的活力,則需要將細(xì)胞懸液和0.4%臺(tái)盼蘭等體積混合
室溫孵育3-5分鐘,使臺(tái)盼蘭進(jìn)入死細(xì)胞,使死細(xì)胞著藍(lán)色
血細(xì)胞計(jì)數(shù)器加樣:
使用吸管將細(xì)胞懸液或細(xì)胞/臺(tái)盼蘭混合液滴加到血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)池的邊緣。此時(shí)液滴將在虹吸的作用下進(jìn)入蓋玻片下方的計(jì)數(shù)池
以同樣的方式在另一側(cè)的計(jì)數(shù)池中也加入細(xì)胞懸液
將計(jì)數(shù)板放置幾分鐘使細(xì)胞擴(kuò)散,同時(shí)用吸水紙吸除多余的液體
細(xì)胞計(jì)數(shù):
在100倍顯微鏡下,移動(dòng)計(jì)數(shù)板將視野對(duì)準(zhǔn)計(jì)數(shù)板的大方塊,該方塊四周有一圈3條平行線(xiàn)包圍,中間有密集的網(wǎng)格。方塊區(qū)差不多剛好可以填滿(mǎn)整個(gè)視野
使用手持式計(jì)數(shù)器記錄計(jì)數(shù)池四個(gè)角以及方塊內(nèi)的細(xì)胞數(shù)(1-5號(hào)位置,經(jīng)典的current-protocol每個(gè)方塊細(xì)胞數(shù)應(yīng)不大于20-50),并重復(fù)記錄另一側(cè)計(jì)數(shù)池中的細(xì)胞數(shù),總計(jì)十個(gè)方塊。計(jì)數(shù)的方法是只計(jì)算上邊和左邊壓線(xiàn)的細(xì)胞,而右邊和下邊壓線(xiàn)的細(xì)胞不予計(jì)算(下圖,總體原則是“計(jì)上不計(jì)下,計(jì)左不計(jì)右”,判斷標(biāo)準(zhǔn)為是否接觸三條邊線(xiàn)的中間線(xiàn))。如果有多個(gè)細(xì)胞沒(méi)有吹散成團(tuán)存在,此時(shí)只可記為一個(gè)細(xì)胞。如果團(tuán)塊很多,則可能需要重新吹打甚至消化直至絕大多數(shù)細(xì)胞為單個(gè)細(xì)胞
杭州川一實(shí)驗(yàn)儀器有限公司專(zhuān)注于全自動(dòng)氮吹儀,一體化蒸餾儀,光化學(xué)反應(yīng)儀,氮?dú)獍l(fā)生器,分子蒸餾儀等, 歡迎致電 17366658694
詞條
詞條說(shuō)明
蒸發(fā)器主要由加熱室及分離室組成。按加熱室的結(jié)構(gòu)和操作時(shí)溶液的流動(dòng)情況,可將工業(yè)中常用的間接加熱蒸發(fā)器分為循環(huán)型(非膜式)和單程型(膜式)兩大類(lèi)。一、循環(huán)型(非膜式)蒸發(fā)器這類(lèi)蒸發(fā)器的特點(diǎn)是溶液在蒸發(fā)器內(nèi)作連續(xù)的循環(huán)運(yùn)動(dòng),以提高傳熱效果、緩和溶液結(jié)垢情況。由于引起循環(huán)運(yùn)動(dòng)的原因不同,可分為自然循環(huán)和強(qiáng)制循環(huán)兩種類(lèi)型。前者是由于溶液在加熱室不同位置上的受熱程度不同,產(chǎn)生了密度差而引起的循環(huán)運(yùn)動(dòng);后者是
隨著氮?dú)獍l(fā)生器的應(yīng)用越來(lái)越廣泛,公司為了自己的產(chǎn)品較有特色,開(kāi)始開(kāi)發(fā)氮?dú)獍l(fā)生設(shè)備的更多新的技術(shù)。而氮?dú)獍l(fā)生器的氣體分離技術(shù)就是各公司研究的重心。該儀器用膜分離技術(shù)和變壓吸附技術(shù)來(lái)生產(chǎn)氮?dú)?,如果顧客?duì)某一種技術(shù)青睞有加,可以根據(jù)客戶(hù)的喜好來(lái)推薦合適的型號(hào)。但是,對(duì)于某些特定的應(yīng)用設(shè)備,使用其中的一種分離技術(shù)比另一種較有優(yōu)勢(shì)。??? 膜分離技術(shù):讓壓縮空氣通過(guò)中空纖維膜,
特征:?孔徑:0.45微米直徑:50mm①省去抽濾瓶、分量輕、體積小,適宜于凈化臺(tái)內(nèi)操作。②濾器呈半透明狀,便于查詢(xún),定量操控。③濾器備有底座,可配套替換,適合于慣例實(shí)驗(yàn)。④每個(gè)濾器設(shè)有閥門(mén),可單運(yùn)用。⑤耐壓、耐溫,可在121℃30分鐘熱壓消毒。微生物限檢測(cè)儀,薄膜過(guò)濾器產(chǎn)品規(guī)格:①濾器內(nèi)徑50mm②有用容積:100ml③分量:60g(單只)④原料為聚碳酸酯,密度圈為硅橡膠⑤備有四頭不銹
恒溫培養(yǎng)搖床溫度設(shè)置與提的設(shè)置方式
一、恒溫培養(yǎng)搖床溫度設(shè)置步驟? 按溫度”功能鍵顯示設(shè)定溫度,再按一下顯示實(shí)測(cè)溫度。按參數(shù)修改/確認(rèn)鍵,再按∧鍵至“3”,再按溫度功能鍵,設(shè)備進(jìn)入溫度參數(shù)設(shè)定狀態(tài),液晶顯示屏顯示溫度設(shè)定值,SV閃亮,按∧∨鍵可改變溫度設(shè)定值;溫度設(shè)定后按參數(shù)修改/確認(rèn)鍵予以確認(rèn)。設(shè)備升溫加熱輸出時(shí),紅色LED指示燈亮。本設(shè)備箱體后背部設(shè)有可調(diào)換氣孔,用于調(diào)節(jié)箱內(nèi)氧量及降低溫度起控點(diǎn)。開(kāi)通時(shí)箱內(nèi)溫度降低約3
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