恒溫培養(yǎng)箱應(yīng)用于大腸桿菌細胞的制備實驗

時間：2023-08-07作者：上海喆圖科學(xué)儀器有限公司瀏覽：25

       電熱恒溫培養(yǎng)箱采用電熱膜加熱方式，在箱體與內(nèi)膽之間安裝電熱膜，使用熱傳遞方式加熱，加熱速度快。多應(yīng)用于實驗室的各種細胞菌類的培養(yǎng)，今天要說的是大腸桿菌，下面喆圖小編講一些操作流程供大家參考一下。




       細胞經(jīng)過一些特殊方法（電擊法、CaCl2法）等處理后，細胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的細胞，即感受態(tài)細胞（Compenent cells）。




       實驗方法原理：




       帶有外源DNA 的重組質(zhì)粒，在體外構(gòu)建后，導(dǎo)入宿主細胞，隨著細胞的大量復(fù)制、繁殖，才能夠**會獲得純的重組質(zhì)粒DNA，該過程稱之為轉(zhuǎn)化過程。受體細胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化學(xué)試劑）的處理后，細胞膜的通透性發(fā)生變化，能容許外源DNA 的載體分子通過。




       實驗材料：




       E. coli DH5α菌株




       試劑、試劑盒：LB固體培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基、CaCl2、鎂、SOB、TFB、儀器、耗材：培養(yǎng)皿、恒溫搖床、聚丙烯管、電熱恒溫培養(yǎng)箱、臺式高速離心機、無菌工作臺、燒瓶、恒溫水浴鍋、低溫冰箱、制冰機、分光光度計、微量移液、錐形瓶、試管




       實驗步驟：




       1、從37℃培養(yǎng)16-20 h的平板中挑取一個單菌落(直徑2-3 mm)，轉(zhuǎn)到一個含有100 ml LB或SOB培養(yǎng)基的1L燒瓶中。于37℃劇烈振搖培養(yǎng)3 h。一般經(jīng)驗，1 OD600約含有大腸桿菌DH5α 109 個/mL。




       2、將細菌轉(zhuǎn)移到一個無菌、一次性使用的、用冰預(yù)冷的50 ml聚丙烯管中，在冰上放置10 min，培養(yǎng)物冷卻至0℃。




       3、于4℃用Sorvall GS3特頭（或與之相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)頭）以4 100 r/min離心10 min，以回收細胞。




       4、倒出培養(yǎng)液，將管倒置1 min以使后的痕量培養(yǎng)液流盡。




       5、每50 ml初始培養(yǎng)液用30 ml預(yù)冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2)重懸每份細胞沉淀。




       6、于4℃用Sorvall GS3轉(zhuǎn)頭（或與之相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)頭）以41 00 r/min離心10 min，以回收細胞。




       7、倒出培養(yǎng)液，將管倒置1min以使后的痕量培養(yǎng)液流盡。




       8、每50ml初始培養(yǎng)物用2ml用冰預(yù)冷的0.1mol/L CaCl2(或TFB)重懸每份細胞沉淀。




       9、此時，可以用新鮮制備的感受態(tài)細胞直接做轉(zhuǎn)化實驗，也可以將細胞凍存于-70℃。




       注意事項：




       1.為達到轉(zhuǎn)化，活細胞數(shù)務(wù)必少于108個細胞/mL，對于大多散大腸桿菌來說，這相當(dāng)于OD值為0.4左右。為保證細菌培養(yǎng)物的生長密度不致過高，可每隔15-20min測定OD600值來監(jiān)測，用監(jiān)測的時間及OD值列一個圖表，以便預(yù)測培養(yǎng)物的OD600值到0.4的時 間，當(dāng)OD600值達到0.35時，收獲細菌培養(yǎng)物。




       2.在菌株與菌株之間，OD值與每毫升中活細胞散間的關(guān)系變化很大，因此有必要通過漶量特定腦桿菌的生長培養(yǎng)物在生長周期的不同時相的OD600值，并將各稀釋維度的培養(yǎng)物鋪于無的LB瓊脂板以計算每一時相的活細胞散，從而使分光光度計讀數(shù)得到標(biāo)準(zhǔn)化。




       3.對大多數(shù)大腸桿菌（MC106除外），采用TFB代替CaCl2可得到相同或較好的結(jié)果。Dagert和Ehrlieh的實驗(1979)曾表明，細胞可以于4℃在CaCl2溶液中保存24-48 h，在貯存的初12-24 h內(nèi)，轉(zhuǎn)化率增加4-6倍，然后降低到初始水平。




       4.的新鮮程度，一定要選新鮮平板的單，即剛涂布生長過夜的平板。




       5.菌體的OD600值，JM109或BL21，OD值為0.35，DH5α為0.4，要盡量保證OD值不要過高，較不能**過0.6。




       6.低溫處理的時間，做完后冰上保存12-24h后分裝，并保存于-80℃。




       7.試劑和用品，所有的用品（離心管、藥瓶等）用新的，如果使用舊的，要確保干凈，CaCl2溶液。


上海喆圖科學(xué)儀器有限公司專注于培養(yǎng)箱,干燥箱,馬弗爐等

• 詞條

  詞條說明

• 用人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)常見蔬菜

  ? ? ? ?蔬菜對生長環(huán)境要求都不同，而適合室內(nèi)種植的蔬菜有韭菜、*、香菜、生菜、黃豆、香蔥、空心菜、油麥菜、櫻桃蘿卜、黃金葉甜菜等，這十種蔬菜對生長環(huán)境要求都不同，而且各自都有著不同的營養(yǎng)**，平時在室內(nèi)種植時，適當(dāng)?shù)慕o其光照就可以了，建議選用人工氣候培養(yǎng)箱。? ? ? ?韭菜對環(huán)境的適應(yīng)能力比較強，而它是可以種

• 光照培養(yǎng)箱的三參數(shù)的“門道”

  ? ? ? ?光照培養(yǎng)箱無非就是控制好三大參數(shù)：溫度、濕度和光照，但千萬別小看這三參數(shù)，要想實現(xiàn)精準(zhǔn)控制，里面的“門道"是非常深的。尤其是在選購儀器的時候，一定要重視這些細節(jié)。今天喆圖小編就要來為大家講一講這三參數(shù)的“門道"！? ? ? ?1.溫度：因為光照培養(yǎng)箱和人工氣候箱都會帶上一個光照的功能，所以在看溫度的時候當(dāng)

• 光照培養(yǎng)箱方法

  ? 光照培養(yǎng)箱是具有光照功能的高精度恒溫設(shè)備，適用于植物育種、細菌霉菌、微生物的培養(yǎng)、水體分析的BOD測定以及其它用途的恒溫試驗，是細菌、霉菌、微生物的培養(yǎng)及育種試驗的恒溫培養(yǎng)裝置。今天喆圖小編就來給大家說說光照培養(yǎng)箱如何進行操作吧：?? 1、要主動出擊，在光照培養(yǎng)箱實驗室里找一找污染源（大污染時一定有），除掉它。? 2、清洗時光照培養(yǎng)箱用70%酒精擦洗，

• 用人工氣候培養(yǎng)箱用來培育綠蘿

  ? ? ? ?植物生長需要適宜的環(huán)境條件，包括溫度、濕度、光照、二氧化碳等，現(xiàn)在為了較好地開展研究，植物*把實驗從室外“搬家"到室內(nèi)，這里有人可能會問，室內(nèi)怎么會有適合植物生長的環(huán)境？喆圖小編告訴你：“是的"，并能準(zhǔn)確控制這些條件這是我們的人工氣候培養(yǎng)箱植物生長設(shè)備由倉體、倉門、壓縮和制冷/加熱系統(tǒng)、輔助電加熱器、加濕器、器、紫外線燈，照明燈及計算機控制系