用恒溫培養(yǎng)箱做植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

時(shí)間：2023-08-04作者：上海喆圖科學(xué)儀器有限公司瀏覽：28

接下來喆圖小編就來給大家講講用恒溫培養(yǎng)箱做植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的基本原理，并通過實(shí)驗(yàn)掌握植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法和技術(shù)，通過實(shí)驗(yàn)練習(xí)和鞏固無菌操作技術(shù)。




一、實(shí)驗(yàn)所需器材如下




 **凈工作臺(tái)、高壓蒸汽器、恒溫培養(yǎng)箱、磁力攪拌器、恒溫培養(yǎng)搖床、鑷子、錐形瓶、水稻種子




二、實(shí)驗(yàn)操作步驟配制培養(yǎng)基




   按照培養(yǎng)基配方取各種藥品，MAX后用蒸餾水定容到所需體積。所配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽后用，固體瓊脂培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶?jī)?nèi)，每瓶約分裝30mL。




 三、水稻種子的




1.將種子置于無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，以體積分?jǐn)?shù)95％的酒精1～2min。




2.取出后用無菌水沖洗2～3 遍。




3.將種子放入25.0g/L 的次中輕輕搖動(dòng)后，浸泡60min 。




四、取出后用無菌水沖洗，將次充分洗凈。




1.接種，在**凈工作臺(tái)內(nèi)，將后的水稻種子接到誘導(dǎo)愈傷組織的固體培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)瓶接5～10 粒種子。接種完畢后用封口膜將培養(yǎng)瓶封好，放在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。




2.懸浮培養(yǎng)的開始，當(dāng)?shù)玫接鷤M織后，將其轉(zhuǎn)人到AA 液體培養(yǎng)基中。注意愈傷組織塊應(yīng)小于3mm . 若組織塊較大可用無菌解剖將其分割成小塊。液體培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶?jī)?nèi)．接種完畢后將瓶口用封口膜封好，把培養(yǎng)瓶放到恒溫培養(yǎng)搖床上進(jìn)行震蕩培養(yǎng)。調(diào)整搖床的旋轉(zhuǎn)速度，使之為120r/min。培養(yǎng)溫度為26℃，在黑暗中培養(yǎng)。




3.懸浮培養(yǎng)物的保持，進(jìn)行懸浮培養(yǎng)后要不斷進(jìn)行觀察，由于培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)與培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)物的密度及細(xì)胞生長(zhǎng)速度有關(guān)，因此當(dāng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)物密度較大時(shí)，應(yīng)及時(shí)用無菌的吸管吸取部分培養(yǎng)物到一新的50mL 培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。同時(shí)還要及時(shí)淘汰一些大的組織團(tuán)塊和黃褐色的壞死組織。一般每隔4～7d 就要繼代一次。




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